汇一科创生物可溶性蛋白表达
操作流程 接种50ul菌种至200ml抗性培养基中,37℃培养过夜。 次日加入新鲜抗性培养基至800ml,培养1-2h至细菌活力最旺盛。 加入200ul的1M IPTG(28℃或37℃)诱导3.5h。 收集菌体(66转/秒×15min),弃上清,加入30ml抽提液悬浮菌体,加入终浓度1mM PMSF和终浓度0.5mM EDTA(his融合蛋白抽提时不加EDTA),冰浴条件下超声波200W破碎6min。 摇床4℃孵育 1h。 高速离心,133转/秒×15min。取上清,加入400ul beads 4℃结合过夜。 收集beads(33转/秒×5min,同时在4℃
2021-11-30